修飾Lysine-C（賴氨酸肽鏈內(nèi)切酶） 測序級
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產(chǎn)品型號：EN-130, 3 x 5 ug
產(chǎn)品代碼：
產(chǎn)品價格：
折 扣 率： 0
最后更新：2017-06-12
關(guān) 注 度：3548
生產(chǎn)企業(yè)：深圳市國泰宜豐科技有限公司
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產(chǎn)品詳細(xì)介紹修飾Lysine-C（賴氨酸肽鏈內(nèi)切酶）測序級
來自于產(chǎn)酶溶桿菌的Lysine-C肽鏈內(nèi)切酶是一種蘇氨酸蛋白酶，它高度特異性地裂解賴氨酸羧基端肽鍵。
Princeton Separations公司測序級肽鏈內(nèi)切酶是高度純化的酶，通過化學(xué)修飾，降低了酶的自裂解，增加了酶的穩(wěn)定性。由于在超的長消化期間酶持續(xù)保持活性，因此可以極好地控制蛋白裂解反應(yīng)。
特性
來自于產(chǎn)酶溶桿菌的Lysine-C肽鏈內(nèi)切酶是一種蘇氨酸蛋白酶，它高度特異性地裂解賴氨酸羧基端肽鍵。
化學(xué)修飾
使用Princeton Separations開發(fā)的一種方法將高純度酶制品進(jìn)行化學(xué)修飾。這種修飾使酶呈現(xiàn)出自分解抗性和穩(wěn)定的酶活性。該修飾酶在30°C反應(yīng)緩沖液中孵育6小時，其仍能保持至少90%的酶活性，在同樣條件下孵育24小時，仍保持65%的活性 ,并仍保留對賴氨酸的特異性。
質(zhì)量控制
我們公司對測序級Lysine-C肽鏈內(nèi)切酶與測序應(yīng)用相關(guān)的質(zhì)量進(jìn)行鑒定。兩種方法控制質(zhì)量：一種是酰胺酶法；另一種是蛋白酶（消化）法，兩種方法都以酪蛋白為底物。以胰蛋白酶作為對照，同時消化酪蛋白，然后兩者進(jìn)行比較，計算出Lysine-C肽鏈內(nèi)切酶與胰蛋白酶活性等價的值。使用合成肽陣列檢測酶的特異性。
制備
每只小瓶裝有Lysine-C內(nèi)切蛋白酶干粉5μg，用20μl去離子水或反緩沖液溶解，使蛋白酶濃度為0.25μg/μl
應(yīng)用
將酶與蛋白以1：20或1：100比值（W/W）混合于標(biāo)準(zhǔn)的消化緩沖液如50mM 碳酸氫銨, pH 7.8 - 8.0。一般25-30°C，孵育1-10小時，在某些情況下可以延長到24小時。根據(jù)被蛋白的性質(zhì)確定孵育時間。通過調(diào)整酶與樣品的比率可得到最佳孵育時間。需要指出的是Lysine-C的消化活性僅為胰蛋白酶的40%。
儲存
溶解的酶應(yīng)冷凍儲存于-10 to - 20°C。
在變性中的穩(wěn)定性
在蛋白難于溶解的情況下，則在消化之前將變性劑如尿素或鹽酸胍加入到蛋白混合液中。下表中所例舉的數(shù)據(jù)顯示變性劑對修飾 Lysine-C活性的影響。
變性劑 濃度 活性控制%
對照 — 100%
尿素 0.50M 100%
尿素 1.00M 100%
尿素 2.00M 100%
鹽酸胍 0.10M 100%
鹽酸胍 0.25M 80%
鹽酸胍 0.50M 30%
鹽酸胍 1.00M 10%
References
Jackson, R. L.., and Wolfe, R. S., J. Biological Chemistry 243, 879 (1968)
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產(chǎn)品目錄 產(chǎn)品說明
EN-130 Lysine-C 3 x 5 ug vials
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